С 2026 года сотрудники Уральского окружного центра по профилактике и борьбе со СПИД приступили к исследовательской работе по трём новым темам НИР: «Оценка распространённости оккультной формы гепатита B в отдельных группах населения», «Система определения фенотипической резистентности вируса гепатита С» и «Влияние цитокинов на структуру теломер клеток лейкоцитарной фракции крови при вирусных инфекциях».
Тема НИР «Оценка распространённости оккультной формы гепатита B в отдельных группах населения»
Прикладная научно-исследовательская работа.
Цель – оценить распространенность оккультной формы гепатита B в отдельных группах населения.
Актуальность проблемы: По оценкам ВОЗ, в 2019 г. в мире насчитывалось 296 миллионов человек, живущих с хроническим гепатитом В, при этом ежегодно происходит около 1,5 миллиона новых случаев инфицирования. В 2019 г. от гепатита В умерли примерно 820 000 человек, главным образом в результате цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы.
По данным Референс-центра по мониторингу за вирусными гепатитами ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора по состоянию на конец 2019 года на диспансерном учете во всех субъектах РФ по поводу ХГB состояло 1126498 человек (Asadi et al., 2023). Особый интерес (и наибольшие трудности) с точки зрения клинической лабораторной диагностики представляет собой оккультный (скрытый), или HBsAg-негативный гепатит В, характеризующийся сохранением ДНК вируса гепатита B в печени и в значительно более низкой, часто не идентифицируемой, концентрации в периферической крови пациентов. При этом оккультный ВГВ может играть существенную роль в развитии фиброза печени и гепатоцеллюлярной карциномы, а также распространяться при гемотрансфузиях (Семенов А.В. и др., 2019).
Ожидаемые результаты по НИР: будет разработана высокочувствительная тест-система для выявления оккультной формы вирусного гепатита B, доступная для применения в любой ПЦР лаборатории и позволяющая осуществлять масштабный скрининг, будет оценена распространенность оккультной формы вирусного гепатита B в наиболее неблагополучных регионах по гемоконтактным вирусным инфекциям, будет создана стандартная панель с известными концентрациями вируса гепатита B, которая обеспечит проведение как внешнелабораторного так и внутрилабораторного контроля качества выявления гепатита В молекулярно-генетическими методами.
Масштабное выявление скрытых форм гепатита В среди доноров позволит избежать распространения данной инфекции среди населения, а выявление оккультного гепатита В среди лиц из групп риска позволит провести им своевременное лечение прервать дальнейшую передачу вируса и предупредить развитие таких осложнений как гепатоцеллюлярная карцинома и цирроз печени.
Тема НИР «Система определения фенотипической резистентности вируса гепатита С»
Прикладная научно-исследовательская работа.
Цель – создание системы определения фенотипической резистентности ВГС для установления связи мутаций полиморфизма с резистентностью к противовирусным лекарственным препаратом, а также для оценки эффективности лекарственных кандидатов.
Актуальность проблемы: по данным ВОЗ, в мире количество инфицированных вирусом гепатита С (НСV) составляет не менее 500 млн. человек, при этом более 170-200 млн. из них являются больными хроническим гепатитом С (ХГС) (5,6,7). Маркеры НСV диагностированы у 1-3% населения земного шара. По данным референс-центра по мониторингу за вирусными гепатитами Роспотребнадзора в России общее число больных хроническим гепатитом С (ХГС), состоящих на диспансерном учёте на 31.12.2022 года составляло 638946 человек. Выявляемость РНК ВГС и ВГС-core-Ag в первом полугодии 2023 года составляла 4,6% (Клушкина В.В., Акимкин В.Г., 2023). Только эффективное лечение ХГС противовирусными препаратами прямого действия способно снизить бремя данного социально-значимого заболевания на общество. Вместе с тем высокая распространённость мутаций лекарственной устойчивости ВГС (МЛУ) к противовирусным препаратам прямого действия (ПППД) создаёт серьёзное препятствие для подавления вирусной нагрузки, обеспечивает возможность дальнейшего распространения инфекции среди населения. В исследовании, проведённом в Красноярском крае, было установлено, что у 67 % пациентов с неэффективностью терапии присутствует хотя бы одна МЛУ к ингибиторам NS5A и у 89% встречаются МЛУ к ингибиторам РНК-полимеразы (NS5B) (Екушов В.Е. и др., 2022). МЛУ были обнаружены в 87% случаев среди пациентов из Санкт-Петербурга с хроническим гепатитом С и рецидивом заболевания на терапии препаратами прямого противовирусного действия (Рейнгардт Д. Э. и др. 2023). Несмотря на то, что современные противовирусные комбинации способны излечивать значительный процент пациентов, инфицированных ВГС, наличие замен, связанных с устойчивостью, снижает успех противовирусной терапии, что является основной проблемой при повторном лечении пациентов, получавших противовирусные препараты прямого действия (ПППД) ВГС склонен к развитию устойчивости к ПППД в результате ошибок РНК-зависимой РНК-полимеразы в сочетании с высокой репликативностью ВГС. Это приводит к ежедневному появлению большого количества генетически различных вариантов вируса у каждого инфицированного индивидуума. Широкий спектр квазивидовых субпопуляций вируса представляет серьёзную проблему для установления связи мутаций полиморфизма в генах, кодирующих неструктурные белки HCV, с устойчивостью вируса к терапии ПППД. Наиболее объективным «in vitro» методом определения лекарственной устойчивости ВГС является определение его фенотипической резистентности. На сегодняшний день в Российской Федерации нет лабораторий, где бы проводились масштабные исследования фенотипической резистентности ВГС.
Ожидаемые результаты по НИР: будет разработана система определения фенотипической резистентности HCV к противовирусным препаратам, позволяющая проводить доклинические исследования кандидатных лекарственных препаратов, ингибирующих ферменты жизненного цикла HCV, устанавливать связь мутаций полиморфизма с фенотипической резистентностью. Будет создана тест-система для секвенирования фрагментов генома HCV, кодирующих белки РНК-протеазу (NS3/4A), РНК-зависимую-РНК-полимеразу (NS5B). Будет разработана отечественная скоринговая база данных и web-сервис для определения генотипической резистентности ВГС, обновляемая за счёт исследований с помощью созданной системы определения фенотипической резистентности HCV. Внедрение системы определения резистентности ВГС позволит скорректировать стратегии лечения, которое в настоящий момент выступает как один наиболее эффективных профилактических подходов, снижающих бремя гепатита C на популяцию. При адекватном подборе ПППД, основанном в том числе на знании о выявленных и/или наиболее распространённых мутациях лекарственной устойчивости, обеспечивается полная элиминация вируса из организма, снижается распространение инфекции среди населения.
Тема НИР «Влияние цитокинов на структуру теломер клеток лейкоцитарной фракции крови при вирусных инфекциях»
Фундаментальная научно-исследовательская работа
Цель – анализ истощения функциональных возможностей иммунной системы в условиях воздействия на организм острых и хронических вирусных инфекций и создание новых подходов к иммунотерапии лиц, после перенесённого заболевания вирусной этиологии и при длительной персистенции вируса, прояснение возможной роли цитокинов в качестве периферических маркеров воспаления, способных оказывать действие на изменение длины теломер клеток лейкоцитарной фракции периферической крови.
Актуальность проблемы: вопрос взаимодействия вирусов с иммунной системой человека имеет ключевое значение в лечении и диагностике вирусных инфекций. После перенесенной инфекции, вызванной SARS-CoV-2, у многих пациентов после выписки из стационаров остаются выраженные полиорганные нарушения, в том числе, формируются вторичные иммунодефицитные состояния, сопровождающихся лейкопенией, резким снижением уровней Т-, В-лимфоцитов, натуральных киллеров и активности фагоцитарного звена иммунитета. Особой группой риска в этих условиях становятся ВИЧ-инфицированные люди, так как именно у этой группы больных формируется со временем синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), который ещё больше усугубляет лейкопению за счет снижение количества CD4 клеток. Истощение иммунной системы является одним из факторов старения организма. Длина теломер и степень метилирования ДНК являются маркерами старения организма, их оценка позволит судить о взаимосвязи острых и хронических вирусных инфекций с клеточным старением. Изучение влияния цитокинового профиля на функциональное состояние иммунной системы позволит разработать подходы к лечению вирусных инфекций и реабилитации в постинфекционный период.
Ожидаемые результаты по НИР: будет разработана и апробирована методика исследования оценки степени метилирования целевых генов путем анализа кривых плавления MS-HRM после бисульфитной конверсии. Будет разработана и апробирована методика анализа относительной длины теломер при помощи ПЦР в реальном времени. Методики исследования длины теломер и степени метилирования ДНК будут объединены в комплексную тест-систему для оценки уровня клеточного старения, которая будет зарегистрирована. Будут получены новые данные о роли аутореактивных клонов В-лимфоцитов (CD45, CD19, CD5, mIgM), NK и TNK (CD3+, 16+, 56+ и (CD3-, 16+, 56+), T-reg (CD3+, CD4+, CD25+, CD127 dimtoneg), Т-клеток их активационных маркеров в периферической крови: (CD45, CD3, CD4, CD8, CD25, CD127, HLA-DR), Т- и В-клеток памяти CD27, CD62L,CD45RA, цитокиновой регуляции нарушений иммунной системы на уровне организма так и местного иммунитета слизистой ротоглотки у ВИЧ-инфицированных лиц, перенесших SARS-CoV-2 с персистенцией вирусов в носоглотке. Будут получены данные о формировании механизмов постковидного и ВИЧ-ассоциированного клеточного и гуморального иммунных ответов. Будут получены новые данные о влиянии цитокинов на изменение теломерных участков хромосом. На основе полученных результатов будет расширена теория патогенеза острых и хронических вирусных инфекций, сформулирована новая концепция, интегрирующая механизмы иммунопатогенеза «постковидного синдрома» у ВИЧ-инфицированных лиц, перенесших SARS-CoV-2 на основе анализа изменений иммунного статуса, специфического иммунного ответа и расшифровки новых молекулярных механизмов инвазии герпетических вирусов, связанных с взаимодействием вирусов с клетками иммунной системы.